Museorautatietä ei olisi ilman toimintaa ylläpitäviä rautatieharrastajia.

Jokioisten Museorautatiellä talkoolaiset työskentelevät vastuullisissa liikenteenhoitotehtävissä. Henkilökuntaa koulututetaan jatkuvasti mm. veturinkuljettajiksi, jarrumiehiksi ja junanlähettäjiksi.

Jokioisen rautatien historiallisen rakennuskannan ylläpito kysyy runsaasti työpanosta joka vuosi. Vanhat seinät kaipaavat uutta maalia, katot uutta kattohuopaa ja rappuset uusia lankkuja.

Museorautatien 14 kilometrin pituinen ratalinja vaatii jatkuvaa ylläpitoa. Pölkkyjä pitää vaihtaa, ratapenkkaa tukea sekä ratalinjaa niittää heinistä ja raivata vesakoista. Talkoolaisten työtä helpottamaan onkin tehty tai hankittu lukuisia koneita, kuten nosturi, tukemiskone ja niittokone.

Museoliikenteen käytössä on toistakymmentä vanhaa matkustajavaunua sekä useita tavaravaunuja. Vaunujen ylläpito vaatii jatkuvaa työtä. Kunnostuksessa vanhojen käsityömenetelmien toistaminen puolestaan vaatii taitoa ja mielikuvitusta.

Museorautatien vetokalusto koostuu viidestä ajokuntoisesta höyryveturista, kuudesta dieselveturista sekä moottoriresiinasta. Vetokalustoa kunnostetaan ja huolletaan Minkiön uudessa korjaamorakennuksessa sekä vanhassa veturihallissa. Erityisesti höyryveturien käyttöön liittyy myös paljon raitista ulkotyötä, silä vetureiden käyttämät halot pitää pilkkoa ja kivihiilet seuloa.